1调查材料
调查对象为随机选取牡丹江的宁安、穆棱、海林、林口4个县区23个养鸡场和29个养鸡农户。分点采集每个养鸡场和养鸡农户的鸡的新鲜粪便20份,分装到干净的塑封袋内,登记编号,带回学校实训室检查;在此期间,对来我校兽医院就诊的疑似球虫病的病鸡,收集其肠内容物,记录养鸡地区名称和饲养方式等信息。共计52个养鸡场(户),粪便和肠内容物样品总计1107份。
2卵囊的分离与收集
将采集的病鸡肠内容物或新鲜粪用饱和食盐水漂浮法收集球虫卵囊。先将采集的样品加水捣碎,用2n0目筛进行过滤和离心沉淀,向沉淀物中加饱和食盐水进行漂浮,取漂浮液用显微镜观察球虫卵囊的有无,离心洗去饱和盐水,收集球虫卵囊,在装有25g/L重铬酸钾溶液的平皿中保存,放置到28℃恒温箱中培养2—3天;得到孢子化卵囊,备用。
3卵囊扩增
保存于4。C上述孢子化卵囊按4×10。个/只鸡的剂量接种于10目龄严格饲养于无球虫环境肉鸡,肉鸡饲养于无卵囊污染的条件,所用饲料均为特别制作,无任何添加药物,感染第5天开始收集粪便,直至第13天收集结束,检查卵囊的增殖情况和各种类的潜隐期,通过观察鸡球虫的特征、裂殖体和寄生部位、病鸡的临床症状和病变部位等来鉴定感染球虫的种类。
4卵囊的鉴定
将扩增得到的卵囊在高倍镜下进行观察,包括卵囊的形态和大小、卵囊壁的厚度和颜色、内外残体和斯氏体的有无、孢子囊的形状等。在29℃恒温培养箱中,每隔2小时观察一次卵囊孢子化。每个种类随机抽样120个鸡球虫,在显微镜下观察卵囊并测量,求出值、小值和平均值,根据卵囊上述生物学特征和参考资料描述进行种类鉴别。